Led микроскопия при туберкулезе

Какие анализы и тесты помогают выявить туберкулез у взрослых: список самых точных методов

Led микроскопия при туберкулезе

Людей, заботящихся о своем здоровье, интересует, как называются анализы, которые нужно сдать, чтобы исключить туберкулез легких у взрослых и детей.

Действительно, ранняя диагностика туберкулеза позволит своевременно начать лечение и предотвратить тяжелые последствия для пациента.

Рассмотрим, какие пробы и лабораторные анализы назначают для выявления в организме микобактерии туберкулеза.

Для проверки на туберкулез применяют в первую очередь:

  • пробу Манту;
  • лабораторное исследование мокроты.

Проведение диагностических мероприятий по выявлению туберкулеза находится в компетенции государственных медицинских организаций. Так, сдать анализы можно в поликлинике или специализированном диспансере.

На сегодняшний день самый точный и достоверный анализ на туберкулез — это проба Манту в сочетании с флюорографией.

Лабораторное выявление возбудителя туберкулеза осуществляется посредством:

  • люминесцентной микроскопии;
  • LED микроскопии;
  • полимеразной цепной реакции (ПЦР);
  • бактериологического посева мокроты;
  • микроскопии по Цилю-Нильсену.

Исследования мочи и крови при туберкулезе не являются основным диагностическим критерием и назначаются для оценки степени тяжести заболевания. Они позволяют выявить возбудителя заболевания в организме, а также зафиксировать его следы.

При отсутствии возможности посетить медицинское учреждение, а также для самостоятельного выявления инфекции можно сдать экспресс-анализ на туберкулез (о нём в следующих главах).

Кровь

В рамках диагностики туберкулеза могут проводиться следующие виды исследования крови:

  1. Общий анализ крови (ОАК). Является частью комплексного исследования. Его результаты лишь косвенно могут свидетельствовать о наличии патологии.
  2. Биохимический анализ крови. Показатели биохимии крови при туберкулезе зависят от фазы заболевания, наличия осложнений и сопутствующих патологий.
  3. Иммуноферментный анализ. Выявляется наличие в крови иммуноглобулина Amg к микобактериям туберкулеза. Допускается применять вместо реакции Манту. Кровь для анализа берется из вены. Недостаток — определить стадию заболевания невозможно.
  4. ПЦР-диагностика. Выявляет специфичные ДНК палочек Коха. Быстрый результат и точные данные.
  5. T-SPOT.TB. Выявляет наличие реактивных Т-эффекторных клеток, синтезирующих интерферон в ответ на воздействие микобактерий. Берется венозная кровь. Метод исследования обладает высокой точностью, до 97%. Исключает ложноположительный результат. Но по результатам этого анализа невозможно дифференцировать латентную фазу заболевания от активной.

Преимущества СПОТ-теста перед Манту

Показатели анализов крови на начальной стадии туберкулеза почти всегда остаются в пределах нормы. При интерпретации показателей ОАК следует обратить внимание на уровень СОЭ и количество лейкоцитов. При тяжелых формах туберкулеза изменяется лейкограмма и иногда фиксируется умеренный лейкоцитоз.

Присутствие в организме палочек Коха можно заподозрить по повышенному количеству эозинофилов: у взрослых – до 5%, у детей – до 8%. Цифры СОЭ при туберкулезе легких у взрослых существенно выше, чем показатели нормы. Для этого заболевания характерно повышение СОЭ до 60 – 80 мм в час.

В целом у больных туберкулезом картина общего анализа крови неспецифична. Результаты зависят от формы течения заболевания, его фазы и продолжительности. Сопутствующие патологии и присоединение вторичной инфекции могут исказить результаты лабораторного исследования.

Моча

Лабораторное исследование мочи с целью выявления возбудителя туберкулеза является вспомогательным диагностическим методом. Поэтому анализ мочи на туберкулез не назначается вместо Манту.

У больных туберкулезом показатели мочи всегда находятся в пределах нормы. Исключение составляют случаи поражения туберкулезом мочевыводящих путей и почек.

Анализ мочи на микобактерии туберкулеза проводится следующими методами:

  1. Бактериоскопия с окрашиванием по Цилю-Нильсену. Биоматериал обесцвечивают серной кислотой и добавляют метиленовую синь. Бактерии туберкулеза окрашиваются в малиновый цвет и становятся хорошо видны под микроскопом.
  2. Бактериологический посев мочи. При наличии в урине болезнетворных микроорганизмов в питательной среде будет происходить их рост.
  3. Биологическая проба. Осадок мочи вводится в брюшную полость подопытного животного (мышь, крыса). Если по истечении 1 месяца оно погибает, значит, человек заражен туберкулезом.

Мокрота

Еще одним анализом на выявление палочки туберкулеза является исследование мокроты. Но оно чаще проводится для подтверждения диагноза, нежели для выявления инфицированных туберкулезом людей. Обнаружение в бронхиальном секрете микобактерий является свидетельством того, что больной выделяет бациллы во внешнюю среду.

Исследование мокроты назначается при появлении у пациента таких симптомов, как длительное повышение температуры и продолжающийся влажный кашель, а также при обнаружении затемнений на флюорографии.

Методы исследования мокроты:

  • Микроскопический (прямой или осадочный методы). Микобактерии выявляют путем окраски биоматериала по Цилю-Нильсену. Важно проводить трехкратное исследование мокроты из нескольких образцов.
  • Флуоресцентная микроскопия с обработкой материала специальными красителями.
  • Культивирование на средах. Для культивирования палочек Коха используют плотные и жидкие питательные среды. Срок ожидания результата может достигать 10 недель.
  • Полимеразная цепная реакция. Прямой метод обнаружения патогенных микроорганизмов. Выявляет наличие ДНК микобактерий. Отличается высокой информативностью и достоверностью. Результат можно получить уже через 4-5 часов.
  • Автоматизированная система BACTEC MGIT.

Исследование мокроты помогает выявить характер патологического процесса, развивающегося в органах дыхания при туберкулезе. Выделения из дыхательных путей для анализа рекомендуется брать утром натощак, после проведения гигиенической обработки полости рта. Собирать материал следует в чистую емкость с плотно закрывающейся крышкой.

При макроскопическом исследовании мокроты оцениваются такие ее показатели, как:

  • консистенция;
  • цвет и запах;
  • количество;
  • характер и форма;
  • реакция.

Посредством микроскопии мокроты можно определить степень инфекционной опасности больного для окружающих и точный штамм бактерии.

Результаты анализа будут отрицательными при скрытой форме туберкулеза, так как в этом случае при кашле не выделяются бактерии.

Туберкулиновые пробы

Туберкулинодиагностика включает несколько тестов, определяющих специфическую сенсибилизацию организма по отношению к микобактериям туберкулеза. Применяется для массового выявления туберкулеза у населения, а также для индивидуальных обследований.

Оценка реакции на туберкулин проводится несколькими методами:

  • Проба Пирке. Это накожный тест. Туберкулиновый раствор наносится на поврежденную кожу.
  • Проба Манту. Проводится внутрикожная инъекция туберкулина.
  • Градуированная проба.
  • Подкожная проба Коха.

Эти диагностические исследования просты в исполнении, доступны и стоят недорого.

Пирке

Это накожное нанесение разведенного очищенного туберкулина. Пробу наносят на участок предплечья.

После обработки раствором на поверхности кожи делают неглубокие насечки (до 5 мм) с помощью скарификатора.

В результате этой манипуляции туберкулин быстро и беспрепятственно проникает в кровь и распространяется по организму. Остатки раствора удаляют ватой. Оценка результата производится через 48 часов:

  • отсутствие аллергической реакции расценивается в качестве нормы;
  • образование папулы диаметром до 3 мм свидетельствует о сомнительном результате. В этом случае пробу повторяют;
  • папула 4-10 мм — включение пациента в группу риска;
  • папула 10-15 мм с образованием язвочек интерпретируется как положительный результат и говорит о том, что человек, с высокой вероятностью, болен туберкулезом.

Манту

Туберкулин для пробы Манту – это очищенный белок, который получают из микобактерий туберкулеза. При его внутрикожном введении проявляется аллергическая реакция. Ее выраженность зависит от того, был ли организм человека «знаком» с возбудителем заболевания. Реакция оценивается спустя 2-3 сутки после выполнения подкожной инъекции. Для пробы Манту используется очищенный туберкулин.

Проведение реакции Манту показано всем детям с возраста 1 год, которые были привиты БЦЖ. Пробу делают 1 раз в год до достижения ребенком возраста 7 лет. Если по каким-то причинам ребенок не был привит БЦЖ, то туберкулиновую пробу ставят дважды в год.

Пробу следует считать положительной, если на месте инъекции образовалась папула диаметром более 15 мм. Размер от 10 до 15 мм также может расцениваться как возможное инфицирование. Последнее в большей степени касается детей младше 4 лет, людей, находящихся в группе риска по туберкулезу и лиц, находящихся в прямом контакте с больными.

Виды реакций на пробу Манту

Не исключается возможность возникновения ложноположительных результатов на пробу Манту. Это может случиться в следующих ситуациях:

  • вакцинация БЦЖ в недавнем времени;
  • неправильное введение туберкулина;
  • заражение нетуберкулезными микобактериями;
  • некорректная интерпретация результата.

Реже встречаются ложноотрицательные результаты пробы Манту. Если были соблюдены все рекомендации относительно графика и правил введения туберкулина, вероятность такого результата минимальна.

Градуированная проба

Ее проводят инфицированным детям с целью определения характера туберкулиновой аллергии. Несколько капель раствора туберкулина различной концентрации наносят на кожу в области предплечья и после делают царапины на коже с помощью скарификатора. В зависимости от результатов определяют активность туберкулезного процесса у пациента.

Подкожная проба Коха

Подкожная туберкулиновая проба Коха предполагает подкожное введение туберкулина. Развиваются общая, очаговая и местная реакции. Первая характеризуется ухудшением состояния обследуемого.

Незначительно повышается температура тела, нарастают признаки интоксикации. Положительная очаговая реакция означает, что нарастают клинические симптомы заболевания. Местная — образование инфильтрата (15-20 мм) в месте введения раствора.

При отсутствии общей и очаговой реакции появление только местной не считается информативным.

Диаскинтест (альтернатива Манту)

Кожной пробой, но не туберкулиновой, является диаскинтест. Этот новейший способ диагностики туберкулеза может служить заменой реакции Манту.

Препарат не содержит туберкулина; в его состав входит рекомбинантный туберкулезный аллерген, который вызывает иммунную реакцию только при наличии в организме человека патогенных микобактерий туберкулеза.

Поэтому, если развилась аллергическая реакция в месте инъекции, человек считается инфицированным.

Диаскинтест отличается высокой информативностью. Техника проведения инъекции, оценка результатов такого анализа идентична пробе Манту. Диаскинтест показан детям после достижения ими 8 лет. Его также проводят, когда результат пробы Манту сомнительный. Эту пробу (не прививку!) можно делать вместо Манту.

Экспресс-тесты

Преимуществом экспресс-методов диагностики туберкулеза является быстрое получение результата, высокая степень достоверности, отсутствие необходимости собирать биоматериал для анализа и нести в лабораторию.

Экспресс-тест на туберкулез можно купить в аптеке и провести самостоятельно в домашних условиях. Проведение теста и получение результата займет не более 10-15 минут.

Такие тесты обладают высокой чувствительностью и выявляют активную фазу заболевания.

Тест на туберкулез называется «Экспресс-тест на туберкулез» или «ИммуноХром-анти-МТ-экспресс». В упаковке содержатся: скарификатор, тест-полоска, буфер в пробирке, спиртовая салфетка, капиллярная трубка для сбора крови и инструкция по применению.

Экспресс-тест на туберкулез

Перед проведением анализа нужно тщательно вымыть руки мылом и сполоснуть горячей водой. Палец протыкают скарификатором и первую каплю крови стирают салфеткой. Затем вновь выделившуюся кровь собирают в капиллярную трубку.

Собранную кровь добавляют в окошечко на тесте, обозначенной буквой «S». Пары капель будет достаточно. Примерно через 1 минуту можно оценить результат. Две полоски розового цвета указывают на положительный результат теста. Отрицательный — одна полоска.

Заключение

Теперь вы знаете, какие анализы выявляют туберкулез. Некоторые из них являются основными — такие, как проба Манту, исследование мокроты, а исследования мочи и крови — дополнительными. Но и те, и другие должны проводится в сочетании с инструментальными методами диагностики — рентгенографией или флюорографией.

Источник: https://bronhus.com/zabolevaniya/tuberkulez-legkie/vzroslye-tb/diagnostika-tb/analizy-i-testy.html

Федеральные клинические рекомендации по организации и проведению микробиологической и молекулярно-генетической диагностики туберкулеза

Led микроскопия при туберкулезе

Черноусова Л. Н., Севастьянова Э. В., Ларионова Е. Е.,           Москва, 2014

Основная цель этих рекомендаций – дать объективную основу для разработки пациент-ориентированной тактики противотуберкулезной помощи и оптимизации лечения пациентов: лечение пациентов должно предотвращать смертность, рецидивы, приобретение/амплификацию устойчивости к противотуберкулезным препаратам и распространение туберкулеза.

Основной целевой аудиторией рекомендаций являются клиницисты (фтизиатры), организаторы здравоохранения вместе с другими медицинскими работниками, занятыми лечением больных туберкулезом. Рекомендации направлены на получение данных для лечения активного туберкулеза у взрослых. Они не содержат многие смежные темы, которые описаны в других публикациях.

Рекомендации содержат отдельные положения по микробиологической и молекулярногенетической диагностике туберкулеза, влияющие на принятие решения в проведении необходимой и достаточной диагностики туберкулеза, выборе необходимого режима лечения, адекватного диагностированному случаю заболевания. Они не исключают дополнительных мер диагностики, уточняющих характеристику микроорганизма, пациента и дающих возможность применять более обосновано арсенал терапевтических мероприятий.

Упоминание тех или иных компаний или названий продуктов отдельных изготовителей не означает, что РОФ отдает им предпочтение по сравнению с другими компаниями или продуктами аналогичного характера, не упомянутыми в тексте.

Диагностика пациентов с подозрением на туберкулез органов дыхания.

Среди лиц, подлежащих обследованию на туберкулез или микобактериоз, в соответствии с действующим Порядком оказания медицинской помощи больным туберкулезом в Российской Федерации, обследованию с целью диагностики туберкулеза органов дыхания подлежат пациенты, имеющие кашель с мокротой, или другие пациенты, при наличии соответствующей клинико-рентгенологической картины и после консультации фтизиатра, в том числе выявленные при диспансеризации по изменениям в рентгено/флюорограммах.

Обследование пациентов с целью дифференциальной диагностики туберкулеза внелегочной локализации.

Обследованию подлежат больные с длительными хроническими процессами, с выраженными клинико-лабораторными и рентгенологическими показаниями и рефракторные к неспецифической антибактериальной и/или другим методам терапии.

В случае пациентов с ВИЧ инфекцией или иных случаев иммунодефицитных и иммуносупрессивных состояний, при проявлении симптомов заболеваний внелегочной локализации необходимо проведение исследований для исключения диагноза «туберкулез» или «микобактериоз».

Диагностический материал. При туберкулезе легких, наиболее распространенной и эпидемически опасной форме заболевания, доступным и часто исследуемым диагностическим материалом является мокрота.

При подозрении на другие формы туберкулез органов дыхания или при невозможности собрать мокроту у пациента с подозрением на туберкулез легких, могут исследоваться и другие виды диагностических материалов (промывные воды бронхов, аспирационный материал, бронхоальвеолярный лаваж, браш-биоптат, биоптат, экссудат и др.).

Исследования внелегочных диагностических материалов проводятся только с целью дифференциальной диагностики туберкулеза внелегочной локализации, при наличии показаний, по назначению фтизиатра и/или после консультации фтизиатра соответствующего профиля.

Приоритетным является подтверждение/исключение наличия микобактерий туберкулезного комплекса (МБТК) в диагностическом материале методами с максимальной доступной чувствительностью и специфичностью.

В связи с этим основными методами являются культуральные исследования на жидких и/или плотных средах и молекулярно-генетические методы (МГМ).

Приоритет исследования определяется лечащим врачом и зависит от клинической ситуации, информативности предыдущих исследований. Чтобы минимизировать вероятность расхождения в результатах, полученных разными методами, комплексное исследование должно проводиться из одной аликвоты клинического материала.

Методы микроскопии. Диагностическая чувствительность метода микроскопии обычно составляет не более 50% от всех больных туберкулезом легких, однако если говорить о наиболее инфекционно-опасных больных (у которых бактериовыделение подтверждено культуральным методом), диагностическая чувствительность метода микроскопии в этом случае достигает 90%.

Методы микроскопии не позволяют дифференцировать микобактерии туберкулеза от нетуберкулезных микобактерий и дают возможность выявлять кислотоустойчивые микроорганизмы (КУМ) только при наличии, по крайней мере, 5000-10000 бактериальных клеток в мл мокроты.

В настоящее время методы микроскопии, обладающие относительно невысокой чувствительностью, сохраняют, тем не менее, свою актуальность, так как позволяют быстро и с минимальными финансовыми затратами выявлять наиболее эпидемически значимых больных туберкулезом и оценивать массивность бактериовыделения.

Методы микроскопии в обязательном порядке включаются во все схемы обследования пациентов в связи с необходимостью определения статуса бактериовыделения согласно классификатору заболеваний и дальнейшему диспансерному наблюдению пациента или при необходимости его целевой госпитализации в специализированное отделение противотуберкулезных учреждений. Современные методы микроскопии требуют обучения персонала. Методы микроскопии настоятельно рекомендуется включать в алгоритм микробиологической диагностики туберкулеза.

Микроскопия с окраской по Цилю-Нильсену. Световая микроскопия препаратов с окраской по Цилю-Нильсену (Ц-Н), приготовленных непосредственно из нативных образцов мокроты или других диагностических материалов, доступна для лабораторий всех уровней.

В бактериологических лабораториях (БЛ) медицинских организаций фтизиатрического профиля субъекта РФ данный метод является актуальным при необходимости экстренного (в течение 1 часа) выявления больных туберкулезом и микобактериозом на первичном этапе обследования до госпитализации с целью определения статуса бактериовыделения.

Идентификация выросших микроорганизмов микроскопией с окраской по Цилю-Нильсену.

При получении роста культуры микроорганизмов на плотной и/или жидкой питательных средах необходимо провести ее идентификацию, а также исключить наличие контаминации посторонней микрофлорой.

Метод окраски по Цилю-Нильсену может быть использован для идентификации выросших микроорганизмов при отсутствии возможности использования современных молекулярных методов.

Методы люминесцентной микроскопии в бактериологических лабораториях медицинских организаций фтизиатрического профиля субъекта РФ в качестве основного метода микроскопического исследования рекомендуется применять методы люминесцентной микроскопии, где в качестве источника излучения может использоваться ртутная лампа или светодиодный излучатель (LED).

Основное преимущество люминесцентной микроскопии перед микроскопией с окраской по Цилю-Нильсену состоит в экономии времени, затрачиваемого на просмотр препарата, за счёт использования меньших увеличений объектива и, соответственно, возможности просматривать большую площадь мазка в поле зрения. Диагностическая чувствительность микроскопии с окраской люминесцентными красителями в среднем на 10% выше, чем микроскопии с окраской по Цилю-Нильсену, однако метод люминесцентной микроскопии требует значительной технической компетенции, а также более высоких капиталовложений и расходов.

Светодиодная (LED) микроскопия. LED технология позволяет сделать микроскопию более доступным анализом за счет более низкой стоимости как самих микроскопов, так и их сервисного обслуживания.

Оценка, проведенная ВОЗ, подтвердила диагностическую точность LED микроскопии по сравнению с традиционной люминесцентной микроскопией и большую эффективность LED по сравнению с микроскопией по Цилю-Нильсену.

Поэтому можно рекомендовать заменять традиционную люминесцентную микроскопию LED микроскопией, которая в качестве альтернативы традиционной световой микроскопии по Цилю-Нильсену может применяться как в крупных, так и в небольших лабораториях.

В связи с тем, что светодиодные люминесцентные микроскопы не требуют высококвалифицированного технического обслуживания и имеют значительно больший срок службы ламп по сравнению с обычными моделями люминесцентных микроскопов, применение данного метода является оправданным с экономической точки зрения и позволяет широко распространить технологию люминесцентной микроскопии для диагностики туберкулеза. Метод светодиодной люминесцентной микроскопии (LED) может быть рекомендован к применению вместо традиционной микроскопии/

Культуральные методы. Культуральные методы диагностики (методы посева диагностического материала на питательные среды с последующей идентификацией выросших микроорганизмов) являются основными методами выделения микобактерий туберкулеза.

Их специфичность превышает специфичность микроскопических методов, а предел обнаружения значительно выше: он позволяет выявить микобактерии (МБ) при наличии в 1 мл исследуемого диагностического материала нескольких сотен и даже десятков жизнеспособных микроорганизмов.

При культивировании используют разные по составу питательные среды, дающие разные возможности роста микобактерий туберкулеза.

Культивирование микобактерий обеспечивает точную диагностику туберкулеза, значительно увеличивая число случаев выявления возбудителя и позволяя подтвердить достоверность поставленного диагноза «туберкулез».

Диагностическая чувствительность культурального метода достигает 70-80% среди впервые выявленных больных туберкулезом легких.

С помощью культурального метода удается выявить на 20-40% больше случаев туберкулезом с бактериовыделением по сравнению с методом микроскопии среди впервые выявленных больных.

Культуральный метод позволяет выделить культуру возбудителя, необходимую для определения его видовой принадлежности и определения спектра и степени лекарственной устойчивости.

 Видовая идентификация выделенной культуры с помощью комплекса современных молекулярных методов позволяет сразу же дифференцировать микобактерии туберкулеза от нетуберкулезных микобактерий и неспецифической микрофлоры.

Культуральные исследования являются достаточно трудоемкими и требуют значительных капиталовложений, наличия помещений и материально-технической базы для приготовления питательных сред, обработки образцов и культивирования микроорганизмов, специализированного лабораторного оборудования и надлежащих условий, обеспечивающих биологическую безопасность. Кроме того, культуральная диагностика требует специализированного обучения персонала.

Медленный рост микобактерий туберкулеза требует значительного времени ожидания результатов исследования.

В среднем, при посеве диагностического материала от впервые выявленных больных для получения результатов на плотных средах требуется 21-36 дней, на жидких средах – 12-22 дня.

Методы культивирования на жидкой и плотной питательных средах могут осуществляться в бактериологических лабораториях разных уровней.

Культивирование на плотных питательных средах.

Метод культивирования микобактерий на плотных средах является менее дорогостоящим, чем в системах культивирования на жидких средах, но получение роста микобактерий на плотных средах занимает гораздо более длительное время (до получения отрицательного результата – 12 недель), чем культивирование микобактерий на жидких средах (42-46 дней). Процесс приготовления плотных питательных сред (ППС) проводится в каждой бактериологической лаборатории самостоятельно и сложно поддается стандартизации.

Однако указанный метод позволяет получить культуру микобактерий для проведения её дальнейших исследований и может быть рекомендован для использования в бактериологической лаборатории на всех этапах диагностики и контроля химиотерапии. Метод культивирования на плотной питательной среде остаётся востребованным и рекомендуется к использованию в лабораторной практике для диагностики туберкулеза в комплексе с другими методами исследования/

Культивирование на жидкой питательной среде в автоматизированной системе учета роста микроорганизмов. С 2006 г. международным сообществом были одобрены несколько новых тестов и диагностических подходов, включая использование жидких питательных сред с быстрой идентификацией в качестве стандартного эталона для подтверждения этиологии заболевания.

Культивирование на жидкой среде повышает выявление микобактерий примерно на 10% по сравнению с плотными питательными средами.

В настоящее время широко используются системы с автоматической детекцией учета роста микобактерий, которые позволяют значительно ускорить получение результата.

В бактериологических лабораториях медицинских организаций фтизиатрического профиля РФ преобладающей является автоматизированная система BACTEC MGIT 960/320.

Преимущества автоматизированной системы культивирования BACTEC MGIT 960/320 перед культуральными исследованиями на плотных питательных средах обеспечиваются высокой эффективностью стандартизованных и сертифицированных по ISO9001 производств реагентов и сред, а также поддержанием стандартных протоколов исследований. Посев на жидкие питательные среды настоятельно рекомендуется при диагностических исследованиях, для обследования впервые выявленных больных и повторных случаев лечения.

Скачать федеральные клинические рекомендации по организации и проведению микробиологической и молекулярно-генетической диагностики туберкулеза.pdf

Источник: https://ftiza.su/federalnyie-klinicheskie-rekomendatsii-po-organizatsii-i-provedeniyu-mikrobiologicheskoy-i-molekulyarno-geneticheskoy-diagnostiki-tuberkuleza/

Анализы на туберкулез

Led микроскопия при туберкулезе

Мокроты больного — это смесь секрета желез слизистой оболочки трахеи и бронхов, серозного выпота из патологически измененных сосудов, иногда частиц казеозных масс, некротической грануляционной и легочной ткани, а также примеси солей. Мокроты выделяется при многих заболеваниях легких и бронхов.

В туберкулезных учреждениях больные собирают мокроту в индивидуальные контейнеры, на четверть емкости заполнены раствором хлорамина, где оно частично дезинфицируется. Контейнеры градуированные, и это дает возможность определять суточное количество мокроты.

Макроскопически у больных туберкулезом легких мокрота имеет слизистый или слизисто-гнойный характер, без запаха, гомогенная, не образует слоев. Количество мокроты может быть разной. В начале заболевания туберкулезом легких мокрота не выделяется, затем оно может выделяться утром отдельными плевками, позже его количество может достигать 100-200 мл.

После макроскопического проводят бактериоскопическое, бактериологическое и биологическое исследование мокроты.

Бактериоскопический метод

Бактериоскопический метод охватывает прямую бактериоскопию мазков из патологического материала, окрашенных по Цилю-Нильсену, бактериоскопию методом флотации, люминесцентную микроскопию, фазовоконтрастного микроскопию.

Бактериоскопическое исследование мокроты начинается с приготовления мазка. Для этого мокроты смешивают с раствором натрия гидроксида и центрифугируют для получения осадка. Осадок стеклянными палочками переносят на предметное стекло.

Вторым предметным стеклом его равномерно размещают: накрывают покровным стеклом. Препарат изучают под микроскопом. В нем можно увидит лейкоциты, эластичные волокна, а при специальной окраске — атипичные клетки и различные бактерии.

Микобактерии окрашиваются по Граму положительно. Для выявления МБТ готовят мазок мокроты высушивают его, фиксируют над пламенем спиртовки, после чего окрашивают по Цилю-Нильсену. Окраска производится сначала карболовым раствором фуксина.

Микобактерии туберкулеза плохо воспринимают окраску, поэтому раствор фуксина наносят на препарат в большом количестве, подогревают над пламенем спиртовки до появления пара. Затем краску сливают, препарат промывают в воде и обесцвечивают в 5% растворе серной кислоты или в смеси этилового спирта с раствором соляной кислоты.

При этом все бактерии и морфологические элементы мокроты, кроме микобактерий туберкулеза, бесцветные. Мазок промывают проточной водой, а затем наносят метиленовый синий на 1-2 мин. После этого раствор краски сливают, мазок промывают и высушивают.

Препарат изучают через иммерсионной систему микроскопа, для чего на препарат наносят каплю иммерсионного масла, чтоб создать одинаковую среду между линзой объектива и препаратом. Микобактерии туберкулеза под микроскопом видно окрашенными в красный цвет.

Метод окраски по Цилю-Нильсену позволяет выявить микобактерии туберкулеза в тех случаях, когда в 1см3 мокроты содержится около 5000 – 10000 МБТ при условии, если просмотрено 300 полей зрения. При небольшом количестве МБТ в мокроте бактериоскопический метод неэффективен.

Исследование мокроты следует проводить в течение трех дней подряд, а при отрицательном результате — применить метод флотации.

Метод флотации

Он основан на том, что при встряхивании двух жидкостей с различным удельным весом легче жидкость всплывает на поверхность одновременно с микобактериями туберкулеза, находящихся в суспензии.

Суть методики заключается в том, что готовят водную суспензию с углеводородами (ксилол, бензол) и МБТ. На поверхность воды утечет сливкообразная пена с МБТ, которую отсасывают пипеткой и наносят на предметное стекло.

Слой пены на предметном стекле высушивают и наносят новый слой пены из колбы. Так наслаивают пену 5-6 раз, после чего мазок фиксируют и окрашивают по Цилю-Нильсену.

Люминесцентная микроскопия

Эффективным методом выявления микобактерий туберкулеза является люминесцентная микроскопия. Суть метода заключается в способности микобактерий туберкулеза, окрашенные специальными красителями (аурамин, родамин), светиться при облучении ультрафиолетовыми лучами.

Преимуществом метода люминесцентной микроскопии является возможность проведения исследований при меньших увеличениях микроскопа, обеспечивает просмотр в короткий срок большего количества полей зрения, чем при обычной микроскопии.

Возможность выявления микобактерий туберкулеза увеличивается на 10-15% по сравнению с обычной бактериоскопии и на 8% – по сравнению с методом флотации.

Используют люминесцентный микроскоп под малым увеличением. На темном фоне видны золотисто-желтые микобактерии туберкулеза.

Фазово-контрастная микроскопия

Это единственный микроскопический метод исследования, позволяющий наблюдать микобактерии и их биологически измененные формы в живом состоянии. Для проведения такого исследования применяют специальное фазовоконтрастное устройство.

При цитологическом исследовании мокроты у больных туберкулезом легких оказывается незначительное количество нейтрофилов в стадии значительной дегенерации на фоне казеозного детрита, скопления мононуклеаров, гигантских клеток Пирогова-Лангханса, иногда эозинофилы.

В случаях, когда мокроты нет или она выделяется в очень малом количестве, больному назначают отхаркивающее микстуру или раздражающие ингаляции. Кроме того, в случаях, когда нет мокроты, исследуют смыв из бронхов.

Исследование смыва из бронхов

Оно проводится врачом. Для этого больному натощак смазывают корень языка, заднюю стенку глотки и надгортанник 1% раствором дикаина. Затем гортанным шприцем вливают в трахею 5-10 мл изотонического раствора натрия хлорида.

У больного сразу возникает сильный кашель и введен изотонический раствор натрия хлорида выкашливается на чашку Петри. Также смыв из бронхов (БАС — бронхоальвеолярный смыв) получают с помощью БАЛ — бронхо-альвеолярного лаважа, который проводят при бронхоскопии. БАЗ исследуют методом флотации или методом посева.

Исследование смыва из бронхов позволяет дополнительно выявлять МБТ в 5-10% случаев.

Исследование мочи, кала, цереброспинальной и плевральной жидкости на МБТ

В клинической практике МБТ нередко приходится проявлять в моче, кале, цереброспинальной и плевральной жидкости. Исследование мочи на МБТ проводят в тех случаях, когда в ходе исследования осадка в каждом поле зрения оказывается не менее 15 лейкоцитов.

Для выявления МБТ мочу многократно центрифугируют, наслаивая каждый раз новые порции с осадка мочи на предметное стекло. Мазок окрашивают по методу Диля-Нильсена. Выявление микобактерий туберкулеза в моче свидетельствует о наличии туберкулеза почек.

Для исследования мочи по методу флотации дают ей постоять, затем 20-30 мл осадка обрабатывают, как обычно, без подогрева на водяной бане. Отсутствие МБТ в гнойной мочи и это не исключает наличия туберкулеза почек. В таких случаях нужно или делать ее посев на питательные среды, или применять биологический метод исследования.

Исследование кала на МБТ следует проводить в случаях подозрения на туберкулез кишок.

При этом надо помнить, что у больных, выделяющих МБТ и частично заглатывают мокроту, МБТ можно выявить при исследовании кала и за непораженных кишок, поскольку микобактерии туберкулеза устойчивы и не всегда погибают под воздействием пищеварительных соков. В кале больных туберкулезом кишок часто оказывается слизь, кровь и примеси гноя.

Обнаружение МБТ в цереброспинальной жидкости нередко имеет решающее значение в диагностике туберкулезного менингита. Однако бактериоскопическим методом выявить МБТ удается только в 10-20% больных туберкулезный менингит. Исследование проводится по следующей методике.

Пробирку с цереброспинальной жидкостью ставят на 8-10 часов в прохладном месте. Если в ней образуется нежная фибринная пленка (она состоит из клеток и МБТ), ее наносят на предметное стекло и готовят препарат по методу Циля-Нильсена.

В случаях, когда пленка не образуется, препарат готовят из осадка после центрифугирования.

Для выявления МБТ в плевральном экссудате, пунктатах и выделении из свищей готовят препарат так же, как и при исследовании мокроты.

Бактериологическое исследование состоит из посева материала на питательные среды и дифференциации культуры МБТ от кислотоустойчивых сапрофитов.

Этим методом можно обнаружить микобактерии туберкулеза, когда в 1 мл материала находится 20-100 микробных клеток. Пробирки со средой помещают в термостат при температуре 37 ° С.

Первые колонии микобактерий могут появиться на 18-30-й день, а иногда — через 2-3 месяца. Бактериологическое исследование проводят одновременно с бактериоскопическим трижды.

Посев исследуемого материала производится на специальные среды после предварительной обработки. Чаще всего используют такие среды: Левенштейна-Йенсена, Финна-2, Миддлбрука, Огава и др., которые содержат вещества, задерживающие рост посторонних микроорганизмов.

Предварительная обработка патологического материала заключается в уничтожении сопроводительной бактериальной флоры. Посев материала из бронхов, а также посев мочи делают из центрифугата или осадка. При этом мочу, если она не загрязнена, можно не обрабатывать.

Предварительная обработка биологического материала

Для подготовки к посеву мокроты, плеврального экссудата, цереброспинальной жидкости существует несколько методов предварительной обработки.

Метод Мазура заключается в обработке патологического материала 3-4 мл 2% раствором серной кислоты в стерильной пробирке. Пробирку встряхивают в течение 3 мин., после чего материал стерильной платиновой петлей наносят на яичные среды.

Метод Петрова: мокроты обрабатывается 4% раствором гидроксида натрия в течение 15 мин., А затем центрифугируется.

Биологический метод

Это привитие патологического материала животным. Гвинейским свинкам или белым мышам в паховой участок или в брюшную полость вводят исследуемый материал в дозе 2-3 мл. Для этого его сначала обрабатывают 3 8% раствором соляной кислоты, хорошо отмывают (иначе на месте введения может возникнуть некроз тканей, возможна даже смерть животного от воздействия кислоты).

Незагрязненную мочу и СМЖ можно прививать без предварительной обработки. При наличии в патологическом материале вирулентных штаммов МБТ ​​животного заболевают туберкулезом и погибают через 1-2 месяца после заражения. Если МБТ масс ослабленную вирулентность, животное погибает позже или может совсем не погибнуть.

В таких случаях животное забивают, и диагноз устанавливают после вскрытия, макро- и микроскопического выявления туберкулезных бугорков. Диагноз можно поставить на основании прижизненного исследования увеличенного регионариого лимфатического узла или инфильтрата, возникший на месте инокуляции патологического материала.

В последние годы для дифференциации микобактерий используют метод газожидкостной хроматографии, основанный на высокой способности различных соединений (аминокислот, нуклеиновых кислот, жиров, углеводов и т. д.). При этом не исключается этап культивирования возбудителя на питательных средах, что можно отнести к недостаткам метода.

Ускоренные методы поиска микобактерий

К ускоренным методам обнаружения микобактерий принадлежат выявления МБТ с помощью индикаторной пробирки ВВL МОИТ. Рост микобактерий туберкулеза происходит в течение 4-10 суток. Пробирки ВВL МОИТ содержат бульон и флуоресцентное соединение, реагирует на кислород, растворенный в бульоне.

Исходная концентрация кислорода не дает яркого свечения. При поглощении кислорода культурой МБТ наблюдается яркая флуоресценция на дне пробирки. Такой результат считают положительным. Если флуоресценции нет или она незначительна — результат отрицательный.

Показания пробирок учитывают ежедневно, начиная со второго дня инкубации.

В последнее время для диагностики туберкулеза используют иммуноферментные и молекулярно-генетические методы.

Молекулярно-генетические методы

Появились методы идентификации МБТ с помощью моноклональных антител, полученных способом гибридомной технологии. Сейчас существует более 100 моноклональных антител к эпитопам основных антигенов МБТ.

Применение этих антител в иммуноферментном анализе дает возможность очень быстро дифференцировать вид возбудителя, но пока метол используется в научных разработках для идентификации возбудителя туберкулеза, который чаще всего встречается.

Среди молекулярно-генетических методов диагностики туберкулеза чаще всего применяется метод ДНК-зондов и полимеразной цепной реакции (ПЦР).

В основе этих методов лежит принцип комплементарности нуклеотидных оснований в построении двуспиральной молекулы ДНК.

При проведении ДНК-зондирования в случае наличия в пробе исследуемого специфического участка ДНК микобактерий образуется гибрид (двухцепной фрагмент) ДНК исследуемого и ДНК-зонда.

В основе приципа ПЦР лежит многократное увеличение фрагмента ДНК.

Для амплификации (многократного удвоения гена бактерий) требуется наличие двух праймеров (затравок) — небольшого одноцепочечного фрагмента ДНК, что соединяется с комплементарной участком одной из цепей матричной ДНК.

В дальнейшем происходит достройка этой цепи ДНК-полимеразой. Увеличение количества (в 106 раз) фрагмента амплифицируемого оказывается электрофорезом в агаровом геле. Учет результатов реакций осуществляется под пластинами трансиллюминатора в ультрафиолетовом свете,

ДНК-зондирование позволяет проводить определение микобактерий в диагностическом материале в течение 2-4 суток, а ПЦР — за 4-6 ч. с максимально высокой чувствительностью методов — 10-100-1000 клеток в пробе исследуемого.

Источник: http://www.eurolab-portal.ru/encyclopedia/323/48749/

ВрачИнфо
Добавить комментарий